Лабораторен подход за диагностика на лизозомни болести на натрупването
thumbnail.default.placeholder
Дата
2014-11-05
Автори
Синигерска/Sinigerska, Иванка Петкова/Ivanka Petkova
Заглавие на списанието
ISSN на списанието
Заглавие на тома
Издател
Резюме
ЦЕЛ И ЗАДАЧИ *****
2.1. ЦЕЛ ***
Разработване на системен аналитичен подход за биохимична диагностика на лизозомни болести на натрупване. *****
2. 2 ЗАДАЧИ ****
2.2.1. Проучване и въвеждане на методи за количествено определяне на глюкозаминогликани в урина и установяване на собствени референтни граници за екскреция на глюкозаминогликани при различни възрастови групи.
2.2.2. Въвеждане на методи за разделяне и качествено доказване на патологична екскреция на глюкозаминогликани и олигозахариди в урина.
2.2.3. Въвеждане на методи за определяне на активност на лизозомни ензими в различни биологични материали - плазма, левкоцити, култивирани кожни фибробласти, хорион, амниотична течност и култивирани амниотични клетки. Установяване на минимални и максимални стойности за ензимна активност при контролни групи лица от българската популация без клинични данни за лизозомна болест.
2.2.4. Въвеждане на система за качествено осигуряване на резултатите.
2.2.5. Разработване и прилагане на системен аналитичен подход за диагностика на
отделни групи лизозомни болести на натрупване.
2.2.6. Провеждане на постнатална и пренатална диагностика на лизозомни болести.
2.2.7. Оценка на ефективността на системния аналитичен подход за диагностика на лизозомни болести на натрупване.
3. МАТЕРИАЛИ И МЕТОДИ
3.1. БИОЛОГИЧЕН И КЛИНИЧЕН МАТЕРИАЛ
2592 проби от обединени порции урини на пациенти без клинични данни за МПЗ на възраст от 2 седмици до 18 год, за въвеждане и валидиране на методи за количествено определяне и качествено доказване на ГАГ, за определяне на максималната екскреция на ГАГ за различни възрастови групи за борат-карбазолов и СРС метод , изработване на референтни граници за екскреция на ГАГ, определена с DMB метод и използвани като контролни проби при тънкослойна хроматография на олигозахариди.
1624 проби кръв с антикоагулант EDTA от пациенти без клинични данни за ЛБН, използвани за изследване активността на лизозомни ензими в плазма и левкоцити на контролни групи.
135 проби кръв накапана и изсушена върху филтърна бланка за изследване на ензимна активност при контролни групи.
447 проби култивирани кожни фибробласти от пациенти без клинични данни за ЛБН за изследване на активността на лизозомни ензими във фибробласти на контролни групи.
265 проби от амниотична течност и култивирани от тях амниотични клетки на бременни в 17-19 г.с. жени с нисък риск за раждане на дете с ЛБН за изследване на активността на лизозомни ензими в амниотична течност и култивирани амниоцити.
85 проби от хорионни въси от бременности , прекъснати по желание в 12 г.с. за изследване на активността на лизозомни ензими в хорионни въси на контролни групи.
3161 пациенти с клинични данни за МПЗ за метаболитна диагностика.
1634 пациенти за постнатална ензимна диагностика на ЛБН.
35 пациенти за ензимен скрининг за болест на Pompe и болест на Fabry в изсушена върху филтърна хартия какпка кръв.
61 пациентки за пренатална ензимна диагностика на ЛБН.7
3.2. РЕАКТИВИ И АПАРАТУРА
3.2.1. РЕАКТИВИ
Използваните киселини, основи, соли и органични разтворители са с най-висока степен на чистота (puriss). Готовите целулозни плаки за тънкослойна хроматография са от MERCK, а целулозо-ацетатните плаки за електрофореза от SARTORIUS Използваните субстрати за ензимните тестове са от SIGMA и MOSCERDAM SUBSTRATES. Реактивът 1,9 диметилметиленово синьо е синтезиран в химическия факултет на СУ „Св. К.Охридски”.
3.2.2. АПАРАТИ
Еднолъчев спектрофотометър UV-Visible 320, SAFAS, Монако, флуориметър Perkin Elmer LS30 с проточна кювета, флуориметър за отчитане на 96 –ямкови плаки Victor D2 (Perkin Elmer), рН метър Radiometer модел PHM63 с комбиниран електрод BDH 309/1005/08, хладилна центрофуга Jоuan, МR1822, ултразвуков хомогенизатор (соникатор) Cole Parmer модел 4710.
Описание
ДИСЕРТАЦИОНЕН ТРУД ЗА ПРИСЪЖДАНЕ НА ОБРАЗОВАТЕЛНА И НАУЧНА СТЕПЕН “ДОКТОР”;
НАУЧЕН РЪКОВОДИТЕЛ: ПРОФ. Д-Р ИВО КРЕМЕНСКИ, ДМ;
НАУЧНО ЖУРИ: ПРОФ. Д-Р ДОБРИН СВИНАРОВ, ДМН - ПРЕДСЕДАТЕЛ И РЕЦЕНЗЕНТ;
ДОЦ. АЛЕКСЕЙ САВОВ, ДБ;
ПРОФ. Д-Р ВЪРБАН ГАНЕВ, ДБН - РЕЦЕНЗЕНТ;
ПРОФ. Д-Р ИВО КРЕМЕНСКИ, ДМ;
ДОЦ. Д-Р ВЕНЕТА ГЕОРГИЕВА-АБАДЖИЕВА, ДМ ***** НАУЧНА СПЕЦИАЛНОСТ: КЛИНИЧНА ЛАБОРАТОРИЯ; София, 2011 г.
Ключови думи
Клинична лаборатория - дисертации; Лизозомни болести на натрупването - дисертации; Вродени, наследствени болести и аномалии - дисертации; Метаболитни болести, вродени - дисертации; Генетични болести, вродени - дисертации; Генетика, медицинска - дисертации , Laboratory Techniques and Procedures - dissertations; Congenital, Hereditary and Neonatal Diseases and Abnormalities - dissertations; Metabolism, Inborn Errors - dissertations; Genetic Diseases, Inborn - dissertations; Lysosomal Storage Diseases - dissertations; Genetics, Medical - dissertations