Изследване на първични човешки клетъчни култури, изолирани от предни лещени капсули на пациенти с катаракта // Analysis of primary human cell cultures isolated from anterior lens capsules of patients with cataract
Зареждане...
Дата
2021
Автори
Хайкин, Васил Маркович //
Haykin, Vasil Markovich
Заглавие на списанието
ISSN на списанието
Заглавие на тома
Издател
Медицински университет - София // Medical University - Sofia
Резюме
ЦЕЛ И ЗАДАЧИ.
Цел:
Изолиране и поддържане на първични човешки лещено епителни клетки от експланти от предна лещена капсула при стандартна факоемулсификация, със или без интраоперативно използване на trypan blue, при пациенти с възрастово обусловена катаракта и при пациенти с диабет тип 2 индуцирана катаракта и изследване и сравнение на основните им клетъчно-физиологични характеристики: миграционна, пролиферативна и диференциационна активности, нивата на вътреклетъчения оксидативен стрес и калцификация на екстрацелуларния им матрикс.
Задачи:
1. Получаване на експлант от предна лещена капсула чрез капсулорексис, със или без интраоперативно използване на trypan blue , на пациенти с възрастово обусловена катаракта и на пациенти с диабет тип 2 индуцирана катаракта.
2. Получаване на първични ЛЕК от предна лещена капсула.
3. Изследване на миграционната активност на ЛЕК при получаване на първични клетъчни култури от trypan blue обагрени и необагрени преднолещени експланти от пациенти с възрастово обусловена катаракта и от пациенти с диабет тип 2 индуцирана катаракта.
4. Изследване на клоногенната активност на ЛЕК при получаване на първични клетъчни култури от trypan blue обагрени и необагрени преднолещени експланти от пациенти с възрастово обусловена катаракта и от пациенти с диабет тип 2 индуцирана катаракта.
5. Изследване на пролиферативната активност на експоненциално растящи първични клетъчни култури от trypan blue обагрени и необагрени преднолещени експланти от пациенти с възрастово обусловена катаракта и от пациенти с диабет тип 2 индуцирана катаракта.
6. Изследване на участието на протеин киназа СК2 в TGFβ2-индуцираният епително-мезенхимен преход на ЛЕК.
7. Изследване на вътреклетъчния оксидативен стрес и калцификация на екстрацелуларният матрикс на първични клетъчни култури от trypan blue обагрени и необагрени преднолещени експланти от пациенти с възрастово обусловена катаракта и от пациенти с диабет тип 2 индуцирана катаракта.
//
SUMMARY.
Aim: Isolation and maintenance of primary human lens epithelial cells (LEC) from anterior lens capsule explants in age-related and type 2 (DM2) induced cataracts and study and comparison of their main cell-physiological characteristics.
Material: 176 explants with adjacent lens-epithelial cells were examined: 148 in age-related cataracts and 28 in DM2.
Methods: explant preparation, supravital staining, LEC preparation and passage, phase contrast microscopy, cytochemical labeling, immunofluorescence labeling, TGFβ2 stimulation, siRNA-mediated attenuation of the endogenous catalytic subunit of CK2, fluorescent staining of LEC, microscopic and statistical analyzes.
Results: The migration of LEC in age-related cataracts started at 5-7 days, and in DM2 at 8-10. 70% cell density in DM2 was reached 7 days later. The colonies in DM2 were three times smaller. LEK in DM2 have lower proliferative activity. In 60% of LEC in DM2 an initial change of the epithelial phenotype to fibroblast-like occurred in vitro. A correlation of TGF-β2-induced increased phosphorylation of ERK1/2 with αSMA expression was found. The highest level of oxidative stress was found in LEC from DM2.
Conclusion: LEC in DM2 have reduced migratory, proliferative and clonogenic activities. CK2 regulates ERK1/2, independent of growth factor TGFβ2. The main reason for the formation of cataracts is damage of the lens by free radicals.
Описание
Ключови думи
офталмология; очни болести; катаракта - хирургия; клетъчни култури; лещени капсули // , ophthalmology; eye diseases; cataract - surgery; cell culture techniques; crystalline lens capsules